那些年做过的免疫组化

Moonshadow 2015-10-12

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免疫组化原理是什么？

当我刚进实验室的时候，就被师姐拉去做了半个月的免疫组化，当时是个小白，师姐让做啥就做啥，也没多想。半个月后，老板问我：“免疫组化原理是什么？”。

我当时心里那个乐啊，早就料到老板会问的，“免疫组化利用的是抗体和抗原之间结合的特异性……”，我bulabulabula说了有十分钟，其实现在看来啥也没有，总结起来就是下面的图。

正当我信心满满等待老板的赞许的时候，老板问了，“那他有什么别的实验替代不了的地方呢？”，这下给我整懵了。

免疫组化优势在哪里？

我急急忙忙翻出做的笔记，吞吞吐吐地说：免疫组化相对于其他来说最大的优势是定位清晰，其次是灵敏度高，再次标本可以长期保存。

老板：“笔记记得还不错，希望下次问你问题时答案不是在笔记上，而是在你脑海中，既然说最大的有点是定位清晰，那下次你给我找几张有代表性的图片来看看”

免疫组化定位典型例子

当然了，对于我这样聪明的人来说，这样的图片难不倒我，直接问度娘了。

胞膜阳性1

胞膜阳性2

胞浆阳性

胞核阳性1

胞核阳性2

我给老板发过去之后，老板回邮件了：

“图找的不错，你这个星期马上去做，如果做不出来上面样的结果，下个月工资就暂扣这了。“

”别……我只有300一个月啊“，我只能心里默默地说，”肯定老板的老板原来也这样对待他的“

对照必不可少——你染的是真的？

科研狗为了300块钱，也要拼了。按照protocol步骤一步一步，小心翼翼，最后染出了一张我认为完美无比的片子，开开心心地找老板。

“你是在浪费我的时间，也是在浪费你自己的时间，你的对照呢？我怎么知道这是我要看的蛋白的染色？”

我只能跑去问师姐，师姐告诉了我如下：

阳性对照目的：排除方法和实验系统有无问题，用已知阳性表达抗原的切片。

阴性对照目的：排除有无一抗外的非特异性染色。分两种，a 阴性组织对照：已知阴性表达的组织。b 阴性试剂对照：空白对照，如PBS。

太好了，小白我总算明白了，那我就做足了对照再找老板。

当我拿着四张全没有的片子去找老板的时候，老板脸都绿了，自然免不了一次“友好祥和”的聊天。这些年来发现造成假阴性的原因如上图的科研狗支招中。

在接下来的免疫组化之中我和老板经历了很多次上述的聊天，经历就不多说了，说多了都是泪，主要如下：

科研小白终于做出了一次让老板满意的结果了，结果是已经过去了近两个月的时间。。。